伯樂CFX Opus 96進行實時熒光定量PCR實驗，所需的試劑和耗材可以系統(tǒng)地分為以下幾大類：

一、伯樂CFX Opus96實時熒光定量PCR系統(tǒng)核心反應(yīng)試劑

1、qPCR預(yù)混液（Master Mix）

（1）種類：根據(jù)檢測方法選擇。

（2）染料法：如SYBR Green qPCR Master Mix（含有SYBR Green I染料、Hot-Start DNA聚合酶、dNTPs、Mg2?、緩沖液等）。伯樂也推薦使用其自家的SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix，其性能與CFX系列儀器經(jīng)過優(yōu)化匹配。

（3）探針法：如TaqMan探針法專用的Master Mix。伯樂對應(yīng)的產(chǎn)品是SsoAdvanced Universal Probes Supermix。

關(guān)鍵點：務(wù)必確認預(yù)混液是否包含ROX等被動參考染料。CFX Opus 96等伯樂儀器不需要添加ROX進行孔間信號校正，因此應(yīng)選擇不含ROX或“For ROX-free instruments"的預(yù)混液。

2、引物與探針

（1）染料法：需要特異性上游和下游引物。

（2）探針法：需要特異性上游和下游引物以及標記了熒光報告基團和淬滅基團的寡核苷酸探針（如TaqMan探針）。

3、模板DNA/cDNA

純化好的基因組DNA、逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA或質(zhì)粒DNA等。

4、Nuclease-Free Water

無核酸酶水，用于稀釋和調(diào)整反應(yīng)體系體積。

二、伯樂CFX Opus96實時熒光定量PCR系統(tǒng)耗材類

1、qPCR反應(yīng)板/八聯(lián)管

（1）96孔反應(yīng)板：常用。必須使用光學級透明的qPCR專用板，確保透光性和熱傳導性。板有平蓋和凸蓋之分，需根據(jù)儀器配備的加熱蓋壓力模式選擇（CFX Opus 96通常使用平蓋）。

（2）八聯(lián)管：靈活性高，適合樣本量少的實驗。同樣需使用光學級透明管和對應(yīng)的平蓋/圓蓋。

（3）提示：強烈建議使用伯樂原裝或認證兼容的耗材（如Hard-Shell® 96孔板），以獲得良好的光學性能和熱循環(huán)一致性。

2、光學密封膜

用于密封96孔板，防止蒸發(fā)和污染。必須是光學透明的密封膜，且能與孔板牢固粘合，在熱循環(huán)過程中不起皺、不翹邊。微孔板封板膜或光學封板膜是標準選擇。

三、伯樂CFX Opus96實時熒光定量PCR系統(tǒng)輔助試劑與耗材

1、RNA提取試劑（如需從RNA開始）：如TRIzol、柱式提取試劑盒等。

2、逆轉(zhuǎn)錄試劑（如需做RT-qPCR）：包含逆轉(zhuǎn)錄酶、隨機引物/oligo dT、dNTPs、RNase抑制劑等的試劑盒。

3、稀釋液：用于標準品梯度稀釋，通?？捎肨E緩沖液或nuclease-free water。

4、實驗室通用耗材：

無菌、無核酸酶離心管（0.2mL PCR管，1.5mL，2.0mL）

帶濾芯槍頭（防止氣溶膠污染，規(guī)格如10μL， 200μL， 1000μL）

微型離心機

渦旋振蕩器

冰盒

四、質(zhì)量控制與標準品

1、陽性對照：已知含有目標序列的模板。

2、陰性對照：

無模板對照：用水代替模板，監(jiān)測體系污染。

無逆轉(zhuǎn)錄對照：用于RT-qPCR，監(jiān)測基因組DNA污染。

3、標準品：用于制作標準曲線、定量分析。通常是已知濃度的梯度稀釋模板（質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物、合成寡核苷酸等）。